본 발명은 원스텝 임뮤노어세이 키트 및 원스텝 임뮤노어세이 키트를 이용한 측정 방법에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시예에 따른 원스텝 임뮤노어세이 키트는 분석 대상물 내의 타겟 항원의 식별 또는 농도를 분석하기 위해, 상기 분석 대상물이 인입되는 인입부를 갖는 반응 영역을 포함하는 원스텝 임뮤노어세이 키트로서, 상기 타겟 항원과 특이적으로 반응하는 제 1 항체 및 상기 제 1 항체를 고정 지지하는 제 1 비드(bead)를 포함하고, 상기 반응 영역에 유지되는 제 1 항체 표지 비드, 상기 타겟 항원과 특이적으로 반응하는 제 2 항체, 상기 제 2 항체를 고정 지지하는 제 2 비드 및 기질을 분해하는 효소를 포함하고, 상기 반응 영역 내에서 상기 제 1 항체 표지 비드와 함께 상기 타겟 항원과 결합되는 경우에는 복합 반응물을 형성하여 상기 반응 영역 내에 유지되고, 상기 타겟 항원과 결합되지 않는 경우에는 상기 반응 영역으로부터 분리되어 측정부로 전달되는 제 2 항체 표지 비드 및 상기 복합 반응물을 형성하지 않은 잔량의 제 2 항체 표지 비드 중 적어도 일부를 포함하는 처리 용액을 선택적으로 획득하여 효소의 기질 분해 반응을 측정하는 측정부를 포함할 수 있다.