1. 과 업 명: PRRS 바이러스 고역가 배양을 위한 유전자 교정 세포주 확립(‘22~‘23)

2. 현황 및 문제점

 현황

❍ 돼지생식기호흡기증후군(PRRSV)은 자돈에서 폐렴, 모돈에서 유·사산을 일으켜 양돈농가의 경제적 손실을 유발함

❍ 국내에서 유럽형(Type 1) 및 북미형(Type 2) 약독화 생백신을 사용하고 있으나 교차방어 효과가 전무하고 병원성 복귀와 농장내 야외주와 재조합에 의한 변이주 발생 위험으로 안전성이 확보된 불활화백신 개발이 요구됨

❍ 불활화백신의 방어효과와 생산단가를 고려하여 고역가 항원 생산이 가능하고, 현재 사용중인 원숭이 신장세포 유래 MARC-145의 이용 한계로 새로운 세포주 개발에 대한 필요 있음

- PRRSV의 세포수용체(CD163)가 발현되는 세포주 개발을 통해 백신 항원을 생산함(포스테라 PRRS)

❍ 최근 유전자 편집기술(Crispr/Cas9) 적용을 통해 백신 항원 생산성이 향상된 세포주 개발 연구가 시도되고 있음

- STAT1 knockout 세포주 개량을 통한 댕기 및 인플루엔자 A 바이러스 생산성 증가

- 항바이러스 관련 유전자 제어된 세포주의 바이러스 증식능 향상(Wu et al., 2017; Kim et al., 2018; Zhu et al., 2016 등)

 문제점

❍ 원숭이 신장세포 유래 MARC-145를 이용한 백신 항원 생산은 PRRSV nsp2 변이에 따른 증식능과 숙주세포 감염기전 차이에 따른 다양한 연구수행에 한계(Song et al., 2019, Yu et al., 2020)

❍ 백신 항원은 생산 세포주 차이에 따라 공격접종 바이러스의 방어능이 상이함(스페인 CSIC 요란다 세비야 연구팀)

3. 과업목표

 PRRSV 효율적 생산을 위한 불멸화 및 유전자 교정 세포주 개발

❍ PRRSV 감수성 세포주 제작

❍ PRRSV 증식능이 향상된 유전자 편집 세포주 제작

4. 과업기간

 1차년도 (계약일 ~ '22. 11.15.)

 2차년도 ('23. 1.1. ~ '23. 11.15.)

5. 주요 과업내용

 최적 불멸화 유도방법을 이용한 PRRSV 감수성 세포주 제작

❍ 다양한 돼지조직 유래 세포 불멸화 유도 및 단일세포 유래 클론 선발

❍ 불멸화 유도방법 확립 및 세포주 제작

❍ PRRSV 특이수용체 발현 세포주 제작 및 감수성·증식능 평가

 유전자 편집기술 적용한 PRRSV 증식능이 향상된 세포주 제작

❍ PRRSV 감염 세포주 전사체 분석 및 타깃 유전자 선발

❍ 유전자 편집기술 확립(SOP 제공) 및 교정 세포주 작성

❍ 최적 세포주 선발 및 증식능 평가

6. 기대성과 및 활용분야

 정성성과

❍ 유전자 교정 기술 기반 확립

❍ PRRSV 백신 항원 효율적 생산 플랫폼 구축

 정량성과

❍ 논문 1편, 표준기술 1건, 학술발표 4건 등

7. 계약방법: 일반경쟁입찰(협상에 의한 계약)

8. 소요예산(총액): 200백만원

※ 1차년도 : 100백만원 / 2차년도 : 100백만원

9. 입찰참가자격

❍ 나라장터에 학술연구용역(업종코드 1169)으로 입찰참가 등록한 업체로서 비영리법인도 참가가능

❍ 추정가격 1억원 이상으로서 “국가를 당사자로 하는 계약에 관한 법률” 제4조 제1항에 의거 중소기업 참여가능

10. 공동수급: 불가능

11. 제출서류

〇 정성제안서: 연구용역사업 신청(계획)서

〇 기타서류: 입찰참가자격 확인서류

12. 제출일시 및 방법: 공고서 참조